{关于指纹图谱的一些问题——请高手来支招。。。}

点击可查看大图。。。


最近在做@#%药材滴指纹图谱。

某三种溶剂提取，按常规梯度跑了一针：

t(min)	A(%)	B(%)
0	5	95
55	80	20
60	100	0
65	5	95

比较谱图，根据出峰情况以及峰信息量多少，最后选定第一种供试品再跑梯度（优化）。。。

t(min)	A(%)	B(%)
0	20	80
40	40	60
60	50	50
65	70	30
75	100	0
80	20	80

20到40分钟的峰是分得比较开了。可是后面的峰，没有之前的整齐了。哈哈，\(^o^)/~

初步推断是60到65min，流动相比例跨度太大的原因，明天继续摸条件。。。 。

哪位大虾有好的建议，尽管提。。。小女子感激不尽！！

回复 micar 的帖子

1. 优化后的图谱20到40分钟的峰分得比较开了，可是后面的峰，没有之前的整齐了。原因应该是流动相比例变化太快。35分钟内乙腈从50%到100%，变化太快，基线不平，分离度也不好。首选调整流动相比例，让它在关键位置变化得慢一些。
2. 如果调整流动相还是分离的不理想，可以考虑在流动相中引入另外一种有机溶剂甲醇，甲醇-乙腈-水，或者甲醇-乙腈-磷酸水，再不行把磷酸换成冰醋酸，经过这样的调整看看是否有改善。不得已选取此方案，三相比较麻烦，尽量不选取此方案。
3. 可以考虑缩短分析的时间，从最后一张图上看，10-20分钟和50-65分钟，基本没有什么有用的信息，你可以缩短他们的分析时间，这样你的工作效率会大大提高，宁可在摸索方法时多花费时间，要不然，进样一针就得80分钟，一天也进不了几针样啊。
4. 如有不妥，还望多指导。

来学习的  指纹图谱  真高深  

0~20min，无峰，考虑在此时间段加快流动相的比例变化
故需在20min设置一个点，使出峰时间提前
20~50min，可延缓流动相变化比例
50~70min，同0~20min处理
70min之后，比例可参考未优化的流动相比例

注：以上时间点，以优化后的图谱为参考

都是高手  

这相对与我问的  问题  简直就是弱智   

不过还好 还有人帮着弱智在忙活   (*^__^*) 嘻嘻……

回复 micar 的帖子


    继续

都是高手  

这相对与我问的  问题  简直就是弱智   

不过还好 还有人帮着弱智在忙活   (*^__^* ...
倚月听风 发表于 2010-8-4 09:30

说我的问题，弱智？！

回复


    继续
↘开心↙ 发表于 2010-8-4 18:44

今天提高柱温进了一针。出问题啦。。。后面都没有进针了。

回复 micar 的帖子


    上图

                                         

回复

1. 优化后的图谱20到40分钟的峰分得比较开了，可是后面的峰，没有之前的整齐了。原因应该是流动相 ...
hope21 发表于 2010-8-3 08:35

乙腈—水跑过，出的峰怪异得很。。。
三相系统偶暂时不会考虑。
另外洗脱梯度不是凭空来滴，先跑的基础梯度，再进行优化！昨天改的梯度，已经分得很开了，但还是80分钟一针。一般指纹图谱控制在一个小时之内，偶是知道滴。但实验才在开始阶段（就这二天），现在就缩短分析时间的话，会丢失很多峰信息量吧？！

回复


    上图
↘开心↙ 发表于 2010-8-4 19:12

没拷回来。。。
就是在三分钟就出了个大峰，峰面积都快上万。。。晕死。。后面一直到48分钟之后才又出现一些小峰。

没拷回来。。。
就是在三分钟就出了个大峰，峰面积都快上万。。。晕死。。后面一直到48分钟之后才又出 ...
micar 发表于 2010-8-4 19:26

你调流动相了？

你调流动相了？
↘开心↙ 发表于 2010-8-4 19:35

流动相还是原来的，就是梯度改了下，但前面三十分钟是一样的。
不是流动相或者梯度的问题。应该是进了气泡。。

流动相还是原来的，就是梯度改了下，但前面三十分钟是一样的。
不是流动相或者梯度的问题。应该是进了 ...
micar 发表于 2010-8-4 19:37

柱子？

检测器？

进气泡一般不太会

会不会流动相被污染了？

柱子？

检测器？

进气泡一般不太会

会不会流动相被污染了？
↘开心↙ 发表于 2010-8-4 19:47

柱压不稳，基线呈波浪状。。。后面把柱温降了，就走平了。但柱压还是不稳。

回复 micar 的帖子


    进气泡了，基线还会稳吗？难道气泡是做的匀速直线运动？

考虑一下哪里堵了

筛板，单向阀

流速正常吗？

回复 micar 的帖子


恭喜你改变梯度后已经分得很开了，作科研要先慢后快。等你把样品的信息量掌握好以后，就可以进行梯度优化，缩短分析时间了，加油。

来学习的  指纹图谱  真高深
倚月听风 发表于 2010-8-3 12:01

指纹图谱就是忽悠人的，别当回事。

指纹图谱就是忽悠人的，别当回事。
hope21 发表于 2010-8-5 07:54

你是说，偶在干忽悠人滴事。。。

你是说，偶在干忽悠人滴事。。。
micar 发表于 2010-8-7 15:13

不敢，不敢。我是和她开个玩笑，让她树立信心。