氨基柱的使用维护保养

我们购买的安捷伦ZORBAX系列的4.6*250mm，5um的氨基柱，使用的流动相为乙腈和磷酸二氢钾的混合溶液，柱子的使用寿命非常短，请问怎样去延长我柱子的使用寿命。

1. 氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，正常情况新氨基柱保存在正相环境中， LUNA 氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中。

2. 正相使用清洗与保存
2.1 收到柱子后，如果使用正相的方法，可直接用流动相平衡。用完后保存在异丙醇或正己烷中。
2.2 推荐先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲10倍柱体积，最后换成流动相。
2.3 正相使用时，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于还原糖的分析；流动相要彻底脱气，并不得含有羰基化合物和过氧化物（质量不好的乙醚、四氢呋喃含有少量）。
2.4任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶！

3. 反相使用清洗与保存
3.1 由于新的LUNA 氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中，与反相流动相是不互溶的，因此如果使用反相的方法，必须用异丙醇冲洗仪器管路，除去管路中的乙腈，甲醇或水，再必须用至少20倍柱体积的异丙醇冲洗过渡（约3h，0.5mL/min），以除去正相保存溶液。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速即可。
再用至少10倍柱体积95％水-5％乙腈（或甲醇）冲洗（不含缓冲盐的流动相可省去），最后用流动相平衡。
用完后洗柱时，必须先用95％水冲洗至少10倍柱体积，除去所用缓冲盐（不含缓冲盐的流动相可省去）。然后保存于乙腈/水（80：20）溶液中。长期不用的话，建议用异丙醇保存。
3.2 任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶，并不会导致盐结晶！
4. 反相使用时色谱柱的再生
     以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH10.0的氨水或氢氧化钠水溶液冲柱子（注意pH值切不可超过11.0），立即用水（ 0.5ml/min的流速，30倍柱体积）冲洗，再乙腈/水（80：20）溶液冲洗保存。

    5. 其它
5.1 反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围，pH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。LUNA 氨基柱pH范围为1.5-11.0，能耐100％水。
5.2 有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质的分析时，酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。


4. 反相使用时色谱柱的再生
     以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH10.0的氨水或氢氧化钠水溶液冲柱子（注意pH值切不可超过11.0），立即用水（ 0.5ml/min的流速，30倍柱体积）冲洗，再乙腈/水（80：20）溶液冲洗保存。

    5. 其它
5.1 反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围，pH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。LUNA 氨基柱pH范围为1.5-11.0，能耐100％水。
5.2 有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质的分析时，酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。

以上是一个氨基柱的厂家工程师提供的，你可以参考一下，基本上这种可用于正相也可用于反相的氨基柱是保存在正相体系的，但最好和厂家确认一下~问一下维护保养的注意事项。我们也在用氨基柱，也比较头疼柱子寿命的事，有机会多多交流~

我咨询过另一家氨基柱厂家的工程师，对方认为磷酸盐浓度高的话，操作结束后水洗时间半小时是不够的，建议洗一个小时

怡然自乐 发表于 2013-7-24 13:18
我咨询过另一家氨基柱厂家的工程师，对方认为磷酸盐浓度高的话，操作结束后水洗时间半小时是不够的，建议洗 ...

非常感谢，以后我们会注意

junyan 发表于 2013-7-26 10:54
非常感谢，以后我们会注意

以后多多交流，我们这么认真的对待，寿命也还是很短的，应该还是有我们不了解的问题存在。

就是啊，这一直是让我们比较头痛的问题。

有些氨基柱不耐受水，用才纯水或低浓度水去冲洗会水解

zc3205 发表于 2013-7-26 12:40
有些氨基柱不耐受水，用才纯水或低浓度水去冲洗会水解

能否指点一下，哪家的氨基柱比较耐水？

怡然自乐 发表于 2013-7-26 13:02
能否指点一下，哪家的氨基柱比较耐水？

每一家都有耐水和不耐水的，买的时候好好问问！我用的就是Waters 不耐水的！

zc3205 发表于 2013-7-27 10:15
每一家都有耐水和不耐水的，买的时候好好问问！我用的就是Waters 不耐水的！

那你们清洗的时候，水的比例是多少呢~，

没有用水哈！我们的流动相没有盐

zc3205 发表于 2013-7-27 15:59
没有用水哈！我们的流动相没有盐

流动相没有盐是蛮好的，我觉得我们使用寿命短，很大的原因是清洗时水解~